“AMINOACIDOS
SEPARACION POR CROMATOGRAFIA EN PAPEL”
Introducción. Los aminoácidos son las unidades
de compuestos orgánicos que, al unirse entre si, forman las proteínas. Los
aminoácidos unidos forman moléculas de mayor tamaño y como resultado las
proteínas, necesarias para la existencia, funcionamiento, mantenimiento de
nuestro organismo.
Su
estructura consta de 3 partes:
·
La
cadena: Radical o grupo R (-CHR-): Es la parte que diferencia los diferentes
aminoácidos entre sí.
Las
otras dos partes de la molécula son las mismas para todos los aminoácidos:
·
Grupo
amino: La molécula termina con un grupo amino. En química, un grupo amino
representa como –NH2+
·
Grupo
carboxilo o acido, representado con –COOH al inicio.
Los
aminoácidos se unen entre sí mediante enlaces peptídicos, formando largas
cadenas de decenas o cientos de aminoácidos. (Licata, 2011)
Tabla. 1. Clasificación de los
aminoácidos
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Aminoácidos
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Esenciales
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No esenciales
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Isoleucina
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Alanina
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Leucina
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Arginina
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Lisina
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Aspargina
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Metionina
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Ácido
Aspartico
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Fenilalanina
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Cistenina
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Triptofano
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Ácido
Glutamico
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Valina
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Glicina
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Histina
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Prolina
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Serina
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Histidina
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La
cromatografía es la técnica para separar componentes de una mezcla, y su
posterior análisis, basadas en que las distintas sustancias que forman los
componentes de una mezcla se dejan arrastrar a diferentes velocidades sobre un
soporte. El soporte puede ser papel, un gas, otro líquido, etc. Es un método
físico de separación de componentes.
Aunque
hay muchas y variadas técnicas cromatografías, el objetivo de todas es separar
las sustancias que forman una mezcla y enviarlas secuencialmente a un detector
para que las determine y cuantifique.
Tipos
de cromatografía:
Dependiendo
de la naturaleza de la fase estática y de la fase móvil se pueden distinguir
distintos tipos de cromatografía.
A.
Cromatografía
solido-liquido: La fase estática o estacionaria es un sólido y la móvil un
liquido
B.
Cromatografía
liquido-liquido: La fase estática o estacionaria es un líquido anclado a un
soporte solido
C.
Cromatografía
liquido-gas: La fase estática o estacionaria es un líquido no volátil
impregnado en un sólido y la fase móvil es un gas
D.
Cromatografía
solido-gas: La fase estacionaria es un sólido y la móvil un gas
Según
el tipo de interacción que se establece entre los componentes de la mezcla y la
fase móvil y estacionaria podemos distinguir entre:
A.
Cromatografía
de adsorción: La fase estacionaria es un sólido polar capaz de absorber a los
componentes de la mezcla mediante interacciones de tipo polar.
B.
Cromatografía
de partición: La separación se basa en las diferencias de solubilidad de los
componentes de la mezcla en las fases estacionaria y móvil, que son ambas
liquidas.
C.
Cromatografía
de intercambio iónico: La fase estacionaria es un sólido que lleva anclados
grupos funcionales ionizables cuya carga se puede intercambiar por aquellos
iones presentes en la fase móvil.
La
cromatografía en papel es la técnica de separación de identificación de
sustancias químicas en la cual la fase estacionaria es agua absorbida y
adsorbida que hay en el papel (papel filtro hecho de celulosa) y el soporte es
el mismo papel. (Amenabar, 2010).
Metodología. En esta práctica realizamos lo
que fue la separación de aminoácidos presentes en una mezcla específica. Esto
se determinó a través de la cromatografía de papel. A continuación se muestran de forma general
lo que se realizó en esta práctica:
Se
prepararon tiras de papel Whatman para cromatografía y con un lápiz se le marco
2.5cm de uno de los extremos, después se le coloco una gota del aminoácido en
el centro de la línea que posteriormente se marcó con lápiz. Y estas tiras de
papel cromatografico se introdujeron en la cámara cromatografía. Después de
haber dejado reposar las tiras hora y media las tiras se extraen de la cámara y estas las secamos
con una secadora de cabello y después de asperjaron las tiras con solución de
ninhidrina en spray y se dejaron secar y se metieron a la estufa a 83°C durante
10 minutos y se retiraron de la estufa y se calculó el valor de Rf
Resultados y discusión. En esta práctica se realizó una
de las técnicas más sencillas para la identificación de aminoácidos la cual fue
la separación por cromatografía en papel con la reacción de la ninhidrina con
la cual se pueden identificar los aminoácidos por la tinción color morado o
magenta que se presentan en ellos.
Tabla.1.Resultados Rf de los aminoácidos
|
Aminoácido
|
Rf
|
|
Lisina
|
0.2
|
|
Alanina
|
0.4
|
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Valina
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0.7
|
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Leucina
|
0.9
|
Los
resultados no fueron los esperados a lo que dictaba la práctica, pero a pesar
de esto los valores son muy cercanos y esto se debió a que la cromatografía de
papel tiene la desventaja de que no es muy exacta en sus resultados.
Díaz
(2008). Dice que esta técnica de separación cromatografía es de las más
simples, aunque también de las más didácticas, ya que aprendemos a preparar y
cortar el papel así como aplicar la muestra y revelar la posición de los
aminoácidos. Y que la reacción de aminoácidos con ninhidrina se debe a la
presencia del grupo a-NH2 en los mismos.
Nieves
(2010). Dice que la cromatografía en capa fina es un caso de cromatografía de
reparo en la que los componentes de una mezcla se separan por diferencia de
solubilidad entre dos sistemas disolventes.
Conclusiones.Esta técnica de
separación cromatografía nos permitió determinar cualitativamente la reacción
producida por medio de la ninhidrina que permite identificar aminoácidos, al aplicar
esta sustancia se torna una coloración morada o magenta.
Cuestionario.
1.
investigue en que se basa la técnica de cromatografía y para que se usa
La
cromatografía comprende un conjunto de técnicas que tienen como finalidad la
separación de mezclas basándose en la diferente capacidad de interacción de
cada componente en otra sustancia.
La
cromatografía en papel se utiliza para separar líquidos o gases en diferentes
componentes.
2.
Investiga a que se debe la aparición del color purpura al rociar con ninhidrina
el papel
La tira de papel contiene los aminoácidos, y al ser rociada con
nihnidrina, esta sustancia oxida los aminoácidos dando un color púrpura.
3. ¿Qué
aminoácido se absorbido más fuerte y porque?
En este caso
el aminoácido que más se absorbió fue la Lisina, debido
a sus diferentes pesos y propiedades, los aminoácidos tienen diferentes grados
de absorción en el papel. Aquellos que se absorben más fuertemente se mueven a
distancia más corta, los que se absorben menos en el papel, se mueven por lo tanto a una distancia más
larga.
Referencias
Bibliográficas.
Ángeles
(2014). Aminoácidos esenciales y no
esenciales. Recuperado el 26 de febrero de 2015 de la fuente http://demedicina.com/aminocidos-esenciales-y-no-esenciales/
Voet
D. y Voet J. G. (2006). Bioquimica .
(3ra Ed.) Mexico: Editorial Medica Panamericana, Pag. 71-77
Stryer
L., Berg J.M. y Tymozko J.L. (2003) Estructura
y función de las proteínas (5ª ed.) España: Editorial Reverte, Pag. 41-76
