“AMINOACIDOS SEPARACION POR CROMATOGRAFIA EN PAPEL”

Introducción. Los aminoácidos son las unidades de compuestos orgánicos que, al unirse entre si, forman las proteínas. Los aminoácidos unidos forman moléculas de mayor tamaño y como resultado las proteínas, necesarias para la existencia, funcionamiento, mantenimiento de nuestro organismo.

Su estructura consta de 3 partes:

·        La cadena: Radical o grupo R (-CHR-): Es la parte que diferencia los diferentes aminoácidos entre sí.

Las otras dos partes de la molécula son las mismas para todos los aminoácidos:

·        Grupo amino: La molécula termina con un grupo amino. En química, un grupo amino representa como –NH2+

·        Grupo carboxilo o acido, representado con –COOH al inicio.

Los aminoácidos se unen entre sí mediante enlaces peptídicos, formando largas cadenas de decenas o cientos de aminoácidos. (Licata, 2011)

Tabla. 1. Clasificación de los aminoácidos

Aminoácidos
Esenciales	No esenciales
Isoleucina	Alanina
Leucina	Arginina
Lisina	Aspargina
Metionina	Ácido Aspartico
Fenilalanina	Cistenina
Triptofano	Ácido Glutamico
Valina	Glicina
Histina	Prolina
	Serina
	Histidina

La cromatografía es la técnica para separar componentes de una mezcla, y su posterior análisis, basadas en que las distintas sustancias que forman los componentes de una mezcla se dejan arrastrar a diferentes velocidades sobre un soporte. El soporte puede ser papel, un gas, otro líquido, etc. Es un método físico de separación de componentes.

Aunque hay muchas y variadas técnicas cromatografías, el objetivo de todas es separar las sustancias que forman una mezcla y enviarlas secuencialmente a un detector para que las determine y cuantifique.

Tipos de cromatografía:

Dependiendo de la naturaleza de la fase estática y de la fase móvil se pueden distinguir distintos tipos de cromatografía.

A.    Cromatografía solido-liquido: La fase estática o estacionaria es un sólido y la móvil un liquido

B.     Cromatografía liquido-liquido: La fase estática o estacionaria es un líquido anclado a un soporte solido

C.     Cromatografía liquido-gas: La fase estática o estacionaria es un líquido no volátil impregnado en un sólido y la fase móvil es un gas

D.    Cromatografía solido-gas: La fase estacionaria es un sólido y la móvil un gas

Según el tipo de interacción que se establece entre los componentes de la mezcla y la fase móvil y estacionaria podemos distinguir entre:

A.    Cromatografía de adsorción: La fase estacionaria es un sólido polar capaz de absorber a los componentes de la mezcla mediante interacciones de tipo polar.

B.     Cromatografía de partición: La separación se basa en las diferencias de solubilidad de los componentes de la mezcla en las fases estacionaria y móvil, que son ambas liquidas.

C.     Cromatografía de intercambio iónico: La fase estacionaria es un sólido que lleva anclados grupos funcionales ionizables cuya carga se puede intercambiar por aquellos iones presentes en la fase móvil.

La cromatografía en papel es la técnica de separación de identificación de sustancias químicas en la cual la fase estacionaria es agua absorbida y adsorbida que hay en el papel (papel filtro hecho de celulosa) y el soporte es el mismo papel. (Amenabar, 2010).

Metodología. En esta práctica realizamos lo que fue la separación de aminoácidos presentes en una mezcla específica. Esto se determinó a través de la cromatografía de papel.  A continuación se muestran de forma general lo que se realizó en esta práctica:

Se prepararon tiras de papel Whatman para cromatografía y con un lápiz se le marco 2.5cm de uno de los extremos, después se le coloco una gota del aminoácido en el centro de la línea que posteriormente se marcó con lápiz. Y estas tiras de papel cromatografico se introdujeron en la cámara cromatografía. Después de haber dejado reposar las tiras hora y media las tiras  se extraen de la cámara y estas las secamos con una secadora de cabello y después de asperjaron las tiras con solución de ninhidrina en spray y se dejaron secar y se metieron a la estufa a 83°C durante 10 minutos y se retiraron de la estufa y se calculó el valor de Rf

Resultados y discusión. En esta práctica se realizó una de las técnicas más sencillas para la identificación de aminoácidos la cual fue la separación por cromatografía en papel con la reacción de la ninhidrina con la cual se pueden identificar los aminoácidos por la tinción color morado o magenta que se presentan en ellos.

Tabla.1.Resultados Rf de los aminoácidos

Aminoácido	Rf
Lisina	0.2
Alanina	0.4
Valina	0.7
Leucina	0.9

Los resultados no fueron los esperados a lo que dictaba la práctica, pero a pesar de esto los valores son muy cercanos y esto se debió a que la cromatografía de papel tiene la desventaja de que no es muy exacta en sus resultados.

Díaz (2008). Dice que esta técnica de separación cromatografía es de las más simples, aunque también de las más didácticas, ya que aprendemos a preparar y cortar el papel así como aplicar la muestra y revelar la posición de los aminoácidos. Y que la reacción de aminoácidos con ninhidrina se debe a la presencia del grupo a-NH2 en los mismos.

Nieves (2010). Dice que la cromatografía en capa fina es un caso de cromatografía de reparo en la que los componentes de una mezcla se separan por diferencia de solubilidad entre dos sistemas disolventes.

Conclusiones.Esta técnica de separación cromatografía nos permitió determinar cualitativamente la reacción producida por medio de la ninhidrina que permite identificar aminoácidos, al aplicar esta sustancia se torna una coloración morada o magenta.

Cuestionario.

1. investigue en que se basa la técnica de cromatografía y para que se usa

La cromatografía comprende un conjunto de técnicas que tienen como finalidad la separación de mezclas basándose en la diferente capacidad de interacción de cada componente en otra sustancia.

La cromatografía en papel se utiliza para separar líquidos o gases en diferentes componentes.

2. Investiga a que se debe la aparición del color purpura al rociar con ninhidrina el papel

La tira de papel contiene los aminoácidos, y al ser rociada con nihnidrina, esta sustancia oxida los aminoácidos dando un color púrpura.

3. ¿Qué aminoácido se absorbido más fuerte y porque?

En este caso el aminoácido que más se absorbió fue la Lisina, debido a sus diferentes pesos y propiedades, los aminoácidos tienen diferentes grados de absorción en el papel. Aquellos que se absorben más fuertemente se mueven a distancia más corta, los que se absorben menos en el papel, se  mueven por lo tanto a una distancia más larga.

Referencias Bibliográficas.

Ángeles (2014). Aminoácidos esenciales y no esenciales. Recuperado el 26 de febrero de 2015 de la fuente http://demedicina.com/aminocidos-esenciales-y-no-esenciales/

Voet D. y Voet J. G. (2006). Bioquimica . (3ra Ed.) Mexico: Editorial Medica Panamericana, Pag. 71-77

Stryer L., Berg J.M. y Tymozko J.L. (2003) Estructura y función de las proteínas (5ª ed.) España: Editorial Reverte, Pag. 41-76