“HIDROLISIS DEL ALMIDON POR LA AMILASA SALIVAL”

Introducción. Las enzimas son proteínas que efectúan una acción catalítica, es decir, favorecen el que se produzca una reacción determinada.

La presencia de enzimas dentro del cuerpo de los animales, permite que muchas reacciones puedan llevarse a cabo bajo condiciones de temperatura constante, y un pH con poca variación.

Existiendo en el cuerpo una gran cantidad de enzimas y de acorde a la práctica detallaremos la enzima amilasa a continuación:

La amilasa es un enzima que actúa en los procesos de digestión de carbohidratos, específicamente actúa sobre el almidón, es una enzima glagolítica.

Su función es hidrolizar los enlaces glucosidicos del tipo alfa 1,4 de la fracción amilosa de la molécula de almidón. La cual desdoblando el almidonhasta alfa dextrinas, y luego hasta maltosa aunque predominan las alfa dextrinas, en cierto punto de la hidrolisis, se producen eritrodextrinas llamas así porque se tiñen de rojo si se usa lugol. (Damazo, 2014)

El objetivo de la práctica fue demostrar la acción que ejerce la amilasa salival sobre el almidón, demostrando la influencia del tiempo, temperatura y pH sobre la enzima.

Metodología. En esta práctica se realizó la hidrolisis del almidón por la amilasa salival se realizó lo siguiente:

1.      Se colocó un trozo de gasa sobre el embudo y se dejó pasar la saliva a través de la gasa y esta se recibió en un vaso precipitado hasta que se llegó a los 10ml

2.      Se rotularon 4 tubos los cuales contenían:

Tabla1.Procedimiento para cada tubo

Solución	Tubo 1	Tubo 2	Tubo 3	Tubo 4
Sol. Almidón	2ml	2ml	2ml	2ml
Lugol	3gotas	3gotas	3gotas	3gotas
Sol. HCL	1ml
Sol. NaOH		1ml
Saliva	1ml	1ml	1ml	1ml

3.      Se tomó el pH de cada tubo

4.      Se colocaron los tubos 1,2 y 3 en baño maría a 40°C y el tubo 4 se colocó en un vaso precipitado que contenía hielo picado.

Resultados y discusión. A continuación se muestran los resultados que se obtuvieron en esta práctica de hidrólisis del almidón por la amilasa salival y de cómo influyo el tiempo, la temperatura y el pH sobre la enzima.

Tabla 1. Resultados de la hidrólisis del almidón por amilasa salival.

Tubo 1	Tubo 2	Tubo 3	Tubo 4
Negativo	Negativo	Positivo	Negativo

Nelson y Cox (2011). Las enzimas tienen un máximo de actividad catalítica a un pH característico denominado pH óptimo. A ambos lados del pH óptimo su actividad catalítica desciende, a menudo de forma abrupta. Así, un pequeño cambio de pH puede provocar una gran diferencia en la velocidad de alguna reacción crucial catalizada enzimáticamente.

Toporek (1984). Dice que en este caso, desde el punto de vista de la naturaleza proteínica de las enzimas, la velocidad de reacción llega a un máximo para un pH óptimo; si el pH sigue aumentando, la velocidad disminuye. Esto se debe probablemente a cambios de la carga neta sobre las proteínas, enzimas y quizá el substrato también, permiten la acción catalítica más eficaz. Los grandes cambios de pH, producidos por adición o bases fuertes, pueden desnaturalizar o inactivar por completo las enzimas.

Campbell (2010). Dice que la elevación de la temperatura de una mezcla de reacción aumenta la energía disponible para que los reactivos alcancen el estado de transición. En consecuencia, la rapidez de un reacción química incrementa con la temperatura en principio. Se dice que el incremento de esta velocidad de reacción con la temperatura ocurre solo hasta cierto límite en las reacciones biológicas. Es útil elevar la temperatura al principio, pero en forma eventual se llega al punto en el cual se alcanza a desnaturalización de la enzima por calor y se ralentiza la reacción.

Toporek (1984). Dice que los experimentos han mostrado que la velocidad de una reacción enzimática es directamente proporcional a la concentración de la enzima; es decir, a mayor concentración de enzimas la reacción es más rápida. Se sabe desde hace mucho que la velocidad de casi cualquier reacción química aumenta con la temperatura. Lo mismo ocurre con las reacciones enzimáticas, pero en vista de la naturaleza proteínica de las enzimas, después de llegar a un máximo, la velocidad vuelve a disminuir por desnaturalización termina de la enzima. Por lo tanto, cada enzima tiene una temperatura óptima, en la cual funciona de la mejor manera.

Conclusiones. En esta práctica se pudo identificar de una forma cualitativa las propiedades de la amilasa salival así como también se identificó la acción de la amilasa de la saliva sobre el almidón y así se demostró que el pH y la temperatura influyen en la acción de la amilasa.

Cuestionario.

1. En función de su acción catalítica específica, las enzimas se clasifican en 6 grandes grupos. Investíguelos y explique la forma de acción que tiene cada uno de los grupos.

·        Oxidorreductasas: Catalizan reacciones de óxido-reducción, es decir, transferencia de H o e^- de un sustrato a otro, según la reacción general. 

AH2 + B

A + BH2

Ared + Box

Aox + Bred

·        Transferasas: Catalizan la transferencia de un grupo químico (distinto al H) de un sustrato a otro, según la reacción:

A-B + C

A + C-B

·        Hidrolasas: Catalizan las reacciones de hidrólisis:

A-B + H2O

AH + B-OH

·        Liasas: Catalizan las reacciones de ruptura o soldadura de sustratos:

A-B

A + B

·        Isomerasas: Catalizan la interconversión de isómeros:

A

B

Son ejemplos la fosfotriosa isomerasa y la fosfoglucosa isomerasa,

·        Ligasas: Catalizan la unión de dos sustratos con hidrólisis simultánea de un neuclótido trifosfato (ATP, GTP, etc.):

A + B + XTP

A-B + XDP + Pi

Un ejemplo es la piruvato carboxilasa, que cataliza la reacción:

piruvato + CO2 + ATP

oxaloacetato + ADP + Pi

2. En base a lo investigado anteriormente, ¿En qué clasificación se encuentra la amilasa?¿Por qué?

En las hidrolasas, porque su acción se basa en la ruptura hidrolítica de enlaces de los compuestos.

3. ¿Cuál es la diferencia entre la S-amilasa y la P-amilasa?

La S-amilasa se encuentra en la saliva, mientras que la P-amilasa se segrega en el páncreas.

4. Investigue como se le llama a la sustancia sobre la cual actúa una enzima.

Sustrato

5. ¿Cuáles son los 3 principales factores que afectan la actividad enzimática? Investigue a profundidad los cambios bioquímicos que ocurren en las enzimas por el efecto de estos 3 factores.

·        Temperatura: Esta presenta 2 etapas. 1) Aumento gradual de la velocidad de la reacción hasta alcanzar un máximo local, que se conoce como temperatura óptima. 2) Disminución progresiva de la velocidad de reacción debido a la inactivación de la enzima por desnaturalización térmica.

·        pH: Los pHs extremos pueden inactivar a la enzima por desnaturalización, por lo que el efecto del pH es similar al efecto de la temperatura sobre la velocidad de la reacción.

·        Concentración del sustrato: A mayor concentración del sustrato, a una concentración fija de la enzima se obtiene la velocidad máxima. Después de que se alcanza esta velocidad, un aumento en la concentración del sustrato no tiene efecto en la velocidad de la reacción. 

6. ¿De qué tipo de iones es dependiente la amilasa para poder realizar su función?

Iones cloruro.

7. ¿Cuál es el pH óptimo de la amilasa?

El pH óptimo de la amilasa se encuentra cercano a 7.

Referencias Bibliográficas.

Aguilar (2010), Acción de la amilasa sobre el almidon. Recuperado el 13 de marzo de 2015 de la fuente: http://karenaguilar06.blogspot.mx/2010/11/accion-de-la-amilaso-sobre-el-almidon.html

Damazo(2014). Hidrolisis del almidón por la amilasa salival. Recuperado el 13 de marzo de 2015 de la fuente: http://es.slideshare.net/lizbethdamazogalvez/hidrlisis-del-almidn-por-la-amilasa-salival

Suarez (2011). Informe practica 2 acción de la amilasa. Recuperado el 13 de marzo de 2015 de la fuente: http://tere-suarez.blogspot.mx/2011/11/informe-practica-2-accion-de-la-amilasa.html

Nelson, D. L. y Cox, M. M. (). Lehninger: Principios de bioquímica. (5ta. ed.). Editorial Omega pag. 63

Campbell, M.K. y Farrel, S.O. (). Bioquímica..pag. 146

Toporek, M. (1984) Bioquímica.(3ra. ed.). México Editorial Interamericana pag. 258,256,257